細胞增殖方法

細胞增殖的定義

細胞以分裂的方式進行增殖。單細胞生物，以細胞分裂的方式產生新的個體。多細胞生物，以細胞分裂的方式產生新的細 胞，用來補充體內衰老或死亡的細胞。

細胞增殖的檢測方法

1）對活細胞的代謝活性的檢測（基于MTT、CCK-8等）

2）DNA合成的檢測（基于BrdU的免疫法或EdU的點擊化學法），可通過體內成像、微孔板或流式細胞術檢測 等多種技術進行細胞示蹤。

細胞代謝活性檢測

MTT（噻唑藍）：通過添加四咪唑鹽到細胞中可進行線粒體內酶代謝活性的測定。活細胞能將四咪唑鹽（如MTT、XTT、WST-1）還原成藍紫色的甲瓚或甲瓚鹽（Formazan），可通過分光光度計或酶標儀進行檢測。

Cell Counting Kit–8 （CCK-8）中的WST-8被細胞內脫氫酶生物還原后生成的橙色甲臜染料能夠溶解在組織培養 基中，生成的甲臜量與活細胞數量成正比。基于CCK-8（WST-8）的試劑盒能高度準確地檢測細胞增殖，比MTT法 及XTT法的靈敏度高5倍，能檢測更低的細胞數目。該試劑盒可適用于96孔板培養的貼壁或懸浮細胞。

DNA的合成的檢測

DNA的新組裝合成是細胞生長的必要條件，故經常被用來進行細胞增殖、細胞活力及凋亡的檢測。 BrdU及EdU，都是胸腺嘧啶的非放射性類似物，能摻入增殖細胞的DNA中，可通過對BrdU及EdU的檢測，從而對DNA的合 成量進行測定。

EdU（5-Ethynyl-2’- deoxyuridine）是一種胸腺嘧啶核苷類似物，能夠在細胞增殖時期代替胸腺嘧啶（T）滲 入正在復制的DNA分子中，通過基于EdU與Apollo®熒光染料的特異性反應快速檢測細胞DNA復制活性，適用于細 胞增殖、細胞分化、生長與發育、DNA修復、病毒復制、細胞標記示蹤等方面的研究，尤其適合進行siRNA、miRNA、小分子化合物及其他藥物的篩選實驗。

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