熒光定量PCR簡(jiǎn)介及原理

熒光定量PCR簡(jiǎn)介

熒光定量PCR檢測(cè)技術(shù)誕生至今已10多年的時(shí)間，而其應(yīng)用一直都沒(méi)廣泛展開(kāi)，究其原因，無(wú)外乎受制于相關(guān)儀器、試劑和技術(shù)的發(fā)展

。近期，尤其是08年以來(lái)，儀器和試劑是遍地開(kāi)花，這也使科研人員均躍躍欲試，都想借此技術(shù)使自己的研究能突飛猛進(jìn)，

發(fā)展勢(shì)頭通過(guò)查找每年所發(fā)表的文章數(shù)可一目了然。據(jù)有關(guān)統(tǒng)計(jì)，在 Medline 數(shù)據(jù)庫(kù)中，用“Taqman" 或 "real time PCR"

作為關(guān)鍵詞檢索，1996 年是19 篇，1999 年157 篇，到2003 年就高達(dá)2984 篇，2009年會(huì)是多少呢？我們不得而知

但其迅猛的發(fā)展勢(shì)頭卻是不可更改的，本公司真誠(chéng)希望能和眾多研究人員共同努力，抓住這一大好時(shí)機(jī)，為科研事業(yè)的發(fā)展貢獻(xiàn)自身的

力量。基于這一目標(biāo)，本公司長(zhǎng)期以來(lái)對(duì)熒光定量PCR，無(wú)論是技術(shù)還是多年來(lái)的產(chǎn)品，均進(jìn)行了深入地研究，

并及時(shí)推出更加優(yōu)異的熒光定量 PCR技術(shù)服務(wù)。

熒光定量PCR原理

熒光定量PCR最早稱(chēng)TaqMan PCR，后來(lái)也叫Real-Time PCR，是美國(guó)PE（Perkin Elmer）公司1995年研制出來(lái)的一種新的核酸定量

技術(shù)。該技術(shù)是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上加入熒光標(biāo)記探針或相應(yīng)的熒光染料來(lái)實(shí)現(xiàn)其定量功能的。其原理：隨著PCR反應(yīng)的進(jìn)行，

PCR反應(yīng)產(chǎn)物不斷累計(jì)，熒光信號(hào)強(qiáng)度也等比例增加。每經(jīng)過(guò)一個(gè)循環(huán)，收集一個(gè)熒光強(qiáng)度信號(hào)，這樣我們就可以通過(guò)熒光強(qiáng)度變化

監(jiān)測(cè)產(chǎn)物量的變化，從而得到一條熒光擴(kuò)增曲線圖。

一般而言，熒光擴(kuò)增曲線可以分成三個(gè)階段：熒光背景信號(hào)階段，熒光信號(hào)指數(shù)擴(kuò)增階段和平臺(tái)期。在熒光背景信號(hào)階段，

擴(kuò)增的熒光信號(hào)被熒光背景信號(hào)所掩蓋，無(wú)法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺(tái)期，擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級(jí)的增加，

PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒(méi)有線性關(guān)系，根據(jù)最終的 PCR 產(chǎn)物量也不能計(jì)算出起始 DNA 拷貝數(shù)。

只有在熒光信號(hào)指數(shù)擴(kuò)增階段， PCR產(chǎn)物量的對(duì)數(shù)值與起始模板量之間存在線性關(guān)系，我們可以選擇在這個(gè)階段進(jìn)行定量分析。

為了定量和比較的方便，在實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 技術(shù)中引入了兩個(gè)非常重要的概念：熒光閾值和 CT值

上海雅吉生物是一家生物企業(yè)主營(yíng)ATCC細(xì)胞，細(xì)胞系，原代細(xì)胞和培養(yǎng)試劑，重組蛋白，ELISA試劑盒、抗體、熒光定量PCR檢測(cè)試劑盒