細胞轉染效率低的幾大因素

細胞轉染效率低的幾大因素

細胞轉染效率低是因為這個

影響轉染試驗的因素：

1轉染試劑跟細胞系不匹配

轉染試劑跟細胞系也是講究配合默契的，使用同一種試劑，不同細胞系轉染效率通常不同。但細胞系的選擇通常是根據(jù)實驗的需要，因此在

轉染實驗前應根據(jù)實驗要求和細胞特性選擇適合的轉染試劑。每種轉染試劑都會提供一些已經(jīng)成功轉染的細胞株列表和文獻，通過這些資料

可選擇適合實驗設計的轉染試劑。當然，適合的是高效、低毒、方便、廉價的轉染試劑。

2細胞狀態(tài)變化

因為有些細胞系是不穩(wěn)定的，可能隨著培養(yǎng)時間的改變，培養(yǎng)條件的不同，不同的選擇壓力，可能引起不同的克隆選擇。因此就算是同一個細胞系，在不同條件下轉染能力的差異可能會

很大

（1）轉染試劑與細胞不匹配

細胞轉染適合的不是原代細胞，也不是傳代很多次的細胞。這是因為細胞培養(yǎng)在實驗室中保存數(shù)月和數(shù)年后會經(jīng)歷突變，總染色體重組或

基因調控變化等而演化。這會導致和轉染相關的細胞行為的變化。適合轉染的細胞是經(jīng)過幾次傳代后達到對數(shù)生長期的細胞，細胞生長旺盛

，最容易轉染。

（2）把握時機

沒錯！轉染也有適當?shù)臅r機，相比較非分裂細胞——分裂細胞往往要比靜止細胞更易于攝取并表達外源DNA。因此對大多數(shù)轉染操作而言，細胞都在轉染當天或前一天種板。

同樣重要的是細胞在種板進行轉染時不應處于過度生長的狀態(tài)，如癌細胞數(shù)量過多，互相疊加，營養(yǎng)物質耗竭，代謝廢物積聚，轉染率低下也是很正常的！

因此，一定要在最適細胞密度時轉染，才能獲得較高的轉染率。不同的轉染試劑，要求轉染時的最適細胞密度各不相同，即使同一種試劑，也會因不同的細胞類型或應用而異。

（3）微生物來搗亂

培養(yǎng)物可被細菌、酵母、真菌、病毒、支原體、甚至其他細胞種類所污染。各種污染都會導致產生錯誤的結果。

（4）交叉污染

如果同一個實驗室同時培養(yǎng)不同種類的細胞，很同意發(fā)生“細胞串門"的現(xiàn)象，造成交叉污染。

3轉染方法

不同轉染試劑有不同的轉染方法，但大多大同小異。轉染時應跟據(jù)具體轉染試劑推薦的方法，但也要注意，因不同實驗室培養(yǎng)的細胞性質不同

，質粒定量差異，操作手法上的差異等，其轉染效果可能不同，應根據(jù)實驗室的具體條件來確定最佳轉染條件。

（1）血清

轉染后未及時加入血清，會導致細胞大量死亡。一般要在轉染后的4-6小時換液且換為有血清的培養(yǎng)基。也可以在原來的無血清培養(yǎng)基里面滴

加血清。這個時候，最好不要換液，不要打擾細胞，讓它安安靜靜地休息。但是也不能過早加入血清。過早的話，會引起未轉染的細胞生

長。那么，什么是最佳時機呢？在20%的細胞變圓的時候，就是加血清的最佳時機。

不過要特別注意：血清是一種包含生長因子及其它輔助因子的不確切成分的添加物，對不同細胞的生長作用有很大的差別。血清質量的變化

直接影響細胞生長，因此也會影響轉染效率。新加培養(yǎng)基的預熱對細胞轉染很有幫助。

（2）DNA質量

DNA質量對轉染效率影響非常大。一般的轉染技術（如脂質體等）基于電荷吸引原理，如果DNA不純，如帶少量的鹽離子，蛋白，代謝物污染都會顯著影響轉染復合物的有效形成及轉染的進行。

4載體構建

轉染載體的構建（病毒載體，質粒DNA，RNA，PCR產物，寡核苷酸等）也影響轉染結果。因此選擇組成或可調控，強度合適的啟動子也很

重要，同時做空載體及其它基因的相同載體構建的轉染正對照可排除毒性影響的干擾。

所以轉染用的質粒首先要保證數(shù)量，一般為2 μg以上。質粒純度不夠或者含有細菌LPS或其他對細胞有毒害作用的物質，也會影響轉染效率。

這個時候，就應該對質粒進行純化和濃縮。