銅檢測試劑盒(Cuprizone微板法)操作方法

銅檢測試劑盒(Cuprizone微板法)

產品簡介：

銅是人體重要的微量元素，是酶的重要組成部分如銅藍蛋白(亞鐵氧化酶)、超氧化物歧化酶、細胞色素氧化酶等，總含量約為90mg，有90~95%的銅與球蛋白結合，形成銅藍蛋白，5~10%的銅與清蛋白結合，清蛋白可作為血漿銅的載體，銅的檢測方法有分光光度計、原子吸收光譜法、中子活化分析法等。

雅吉生物銅檢測試劑盒(Cuprizone微板法)檢測原理是在酸性介質中與白蛋白結合的銅從白蛋白中解離出來，經沉淀蛋白質后銅離子與Cuprizone絡合，形成穩定的藍色絡合物，通過酶標儀測定620nm處吸光度，形成的藍色與血清、血漿銅成線性關系，與標準品比較，根據公式計算出銅含量，該檢測試劑盒在62.8μmol/L以下線性關系良好，特異性高，較為靈敏。該試劑盒僅用于科研領域，不適用于臨床診斷或其他用途。

該試劑盒僅用于科研領域，不適用于臨床診斷或其他用途。

產品組成：

自備材料：

1、酶標儀、96孔板

2、1.5ml離心管或試管

3、離心機

操作步驟(僅供參考)：

1、制備樣品∶血漿、血清按照常規方法制備，可以直接用于該試劑盒的測定，-20℃凍存，用于Cu的檢測。

2、配制銅標準工作液︰取適量的銅標準(100μg/ml)，按銅標準(100μg/ml)∶銅標準稀釋液=1:24的比例配制銅標準(4μg/ml)，即為銅標準工作液;4℃避光保存，3個月有效。

3、Cu加樣∶最好選用經稀鹽酸處理及去離子水清潔的干燥試管或者一次性無菌聚乙烯1.5ml離心管，以及潔凈96孔板，如果無法達到上述要求，應盡量避免使用銅污染的器皿，按下表操作。

4、Cu測定∶混勻，室溫靜置20min，以空白調零，酶標儀620nm處測定標準孔和測定孔的吸光度(即為A_標準和A_測定)。

計算:

血漿、血清銅(μmol/L)=(A_測定/A_標準）×62.8

式中∶A_測定=測定管的吸光度

A_標準=標準管的吸光度

銅標準(4μg/ml)=銅標準(62.8μmol/L)

μg/dl=μmol/L/0.157

參考區間∶

成年健康人血清銅︰

男性∶10.99~21.98μmol/L(70~140μg/dl)

女性∶12.56~23.55μmol/L(80~150μg/dl)

注意事項∶

1、如果樣品濃度過高，應用去離子水稀釋后重測，結果乘以稀釋倍數。

2、實驗過程中用到的水，不可用普通的蒸餾水，盡量采用高純度的去離子水。

3、玻璃器材盡量用10%的鹽酸浸泡24h，取出后用去離子水沖洗后才可以使用。

4、試驗中儀器、試管、注射器等盡量避免銅污染。

5、測定波長可選600~640nm，檢測結果差異不大。

6、該試劑盒呈色穩定，顯色后在4~20℃可穩定1h。

7、隨著時間的延長，顏色會變淺或消失，應在1h內檢測完畢。

8、Cu Assay Buffer應密閉保存，用完立即蓋緊蓋子，防止有效成分揮發。

9、經典標準品采用銅標準(2μg/ml)，如儀器精密干擾小，可以采用銅標準(2μg/ml)，其計算公式為︰血漿、血清銅(μmol/L)=(A_測定/A_標準)×31.4。

有效期∶12個月有效﹔常溫運輸，4C保存。

注意∶由于檢測儀器和操作手法等條件的不同，參考值范圍會有波動，該值僅供參考，對于要求精確計算銅含量的，可以采用標準曲線進行多點測定;根據雅吉生物測定經驗顯示，標準品濃度在0.5μg/ml 以下，50μg/ml 以上，標準曲線會有偏差。