單克隆抗體的制備原理

原理1：單克隆抗體（MAb）與抗血清（又稱多克隆抗體，PAb）最主要的區(qū)別是MAb為單一種B細(xì)胞克隆所產(chǎn)生的一種均一的免疫球蛋

白分子。所以MAb是B細(xì)胞克隆的標(biāo)志，是一種的抗體，它的特異性是針對一個抗原決定簇的。制備單克隆抗體不能用化學(xué)分離的方法

從多克隆抗體中去分離純化得到它，而是用分離產(chǎn)生抗體的B細(xì)胞克隆的方法得到它。為了使B細(xì)胞克隆能在體外人工培養(yǎng)下長期存活并產(chǎn)生

均一的MAb，G．K?hler合Milstein于1975年創(chuàng)立了雜交瘤方法。所以制備單克隆抗體的技術(shù)又稱雜交瘤技術(shù)

（hybredoma technique）。

　　雜交瘤技術(shù)的基本原理是用分泌抗體但不能長期培養(yǎng)的B細(xì)胞與能在體外長期培養(yǎng)并可低溫保存的腫瘤細(xì)胞進行雜交。篩選得到的雜交瘤

細(xì)胞應(yīng)該是既能分泌抗體又有瘤細(xì)胞的特性，可長期傳代培養(yǎng)，又可在液氮中保存的細(xì)胞。把這些細(xì)胞單克隆化，用單克隆化的雜交瘤細(xì)胞

進行單克隆抗體的生產(chǎn)。

　　原理：常用的單克隆抗體是小鼠的單抗，此外也有大鼠的和人源的單抗。人源單抗制備比較復(fù)雜。小鼠單抗的制備通常是使用Balb/c

小鼠的B細(xì)胞和它的骨髓瘤細(xì)胞。大鼠的單抗制備通常用Lou/c大鼠及其骨髓瘤和Y3/AO大鼠及其骨髓瘤細(xì)胞。B細(xì)胞是從免疫動物的脾臟中

分離出來的。動物免疫方法與抗血清制備相同，只是在制備脾臟前3d必須進行一次靜脈加強注射以保證得到的B細(xì)胞有旺盛的分泌抗體的活性

。骨髓瘤細(xì)胞有許多細(xì)胞株是經(jīng)過誘變和篩選得到的缺陷型。篩選的標(biāo)準(zhǔn)是①瘤細(xì)胞本身不產(chǎn)生抗體或者產(chǎn)生抗體的某種鏈，但不能分泌；

②是次黃嘌呤鳥嘌呤核苷酸轉(zhuǎn)移酶（HGPRT）和胸腺嘧啶激酶（TK）的缺陷型。因為這種缺陷型的瘤細(xì)胞正常的核酸合成途徑被氨基喋吟

（aminopterin）阻斷后，由于缺失這些酶，即使補充它的底物次黃嘌呤（H）和胸腺嘧啶（T），核酸合成的旁路也不能起到救援的作用

，結(jié)果導(dǎo)致瘤細(xì)胞死亡（圖7—2）。而雜交瘤細(xì)胞因帶有B細(xì)胞的全套基因，在HAT存在的條件下借助于HGPRT和TK的作用通過替代的核酸

合成途徑能正常合成DNA和RNA。所以雜交瘤能正常地生長繁殖而被選擇出來。未被融合的游離的B細(xì)胞只能存活3d而后自行死亡。

這就是用HAT培養(yǎng)基進行選擇的原理