免疫組化實驗過程中出現的常見問題分析

1. IHC實驗結果顯色過深

一抗濃度過高或孵育時間過長——降低一抗濃度或減少孵育時間

孵育溫度過高——選擇4℃或室溫孵育

2. 實驗結果存在非特異性顯色

石蠟切片脫蠟不干凈——延長脫蠟時間

蛋白封閉不充分——增加蛋白封閉時間

組織富含內源性生物素與過氧化物酶——使用相關試劑進行封閉

3. 實驗結果顯色弱或無染色

一抗濃度過低或孵育時間過短——增加一抗濃度或延長孵育時間

組織中無目的抗原的表達

一抗種屬來源與二抗不匹配

注意事項

切片脫蠟和水化要充分，加反應液時要覆蓋組織充分；每次加液前甩干洗滌液，同時防止干片。

一抗的沖洗原則：單獨沖洗，防交叉反應污染；溫柔沖洗，防止切片脫落；推薦浸洗方式。

有條件的話最好立即拍照，若不能及時拍照，也要封好片和用指甲油封固，保持避光和濕度。