4個步驟帶你拿捏流式細(xì)胞術(shù)

第一步

設(shè)計你的流式細(xì)胞實驗

很多同學(xué)在實驗設(shè)計的時候就埋下了隱患，最常見的問題就是——對照設(shè)置不合理，最后導(dǎo)致整體實驗失敗或數(shù)據(jù)不理想。

流式對照至少有 5 種。

生物學(xué)對照，空白對照，同型對照（Isotype control），補(bǔ)償對照（也叫單陽性對照）和 FMO 對照，主要目的是為了避免出現(xiàn)的假陽性或

假陰性結(jié)果。

第二步

細(xì)胞懸液樣本制備

流式細(xì)胞術(shù)的分析檢測建立在單個細(xì)胞的基礎(chǔ)上，所以制備合格的單個分散的細(xì)胞懸液是非常關(guān)鍵的一環(huán)。

對不同來源和不同形式的樣品，根據(jù)各種樣品的特點(diǎn)可選擇不同的分散方法。

單層培養(yǎng)細(xì)胞、血液、各種脫落細(xì)胞等樣品

標(biāo)本經(jīng)過簡單的制備懸液，離心分離處理，就可以得到分散較好的單個細(xì)胞懸液，是理想的流式細(xì)胞術(shù)檢測對象。

不同組織來源的實體組織標(biāo)本

采用酶消化法、機(jī)械法和化學(xué)試劑處理法來分散細(xì)胞。

石蠟包埋組織單細(xì)胞懸液

可使大量存檔的臨床資料重新得到研究與利用，從而擴(kuò)大了流式細(xì)胞術(shù)的應(yīng)用范圍。樣品制備一般通過切片、脫脂、水化、消化及終止消化后過濾再收集細(xì)胞懸液，去除碎片的單細(xì)胞懸液用 70％ 乙醇固定保存。

第三步

流式檢測操作流程

很多同學(xué)第一次操作流式細(xì)胞儀器的時候非常緊張，生怕哪一步做錯，弄壞了上百萬的實驗設(shè)備。儀器的操作確實有很多講究，比如：

「檢查供液槽和廢液槽：供液槽應(yīng)含足夠的儀器緩沖液，廢液槽應(yīng)在上次使用后清洗干凈。

第四步

流式檢測結(jié)果分析

實驗結(jié)果圖通常有一維直方圖、二維點(diǎn)圖、等高線圖、密度圖等幾種。