磷酸化絲裂原活化蛋白激酶磷酸酶-1抗體免疫標記實驗注意事項

我公司可提供各種標記物的該抗體:磷酸化絲裂原活化蛋白激酶磷酸酶-1抗體Phospho-MKP1(Ser359)免疫標記

包括以下各類:AP ,APC , FITC ,Cy3  ,Cy5  , Biotin , PE-Cy3 ,PE-CY5      Alexa Fluor 350 , Alexa Fluor 488,PE ,HRP,Gold ,  Cy5.5 , Cy7 ,RBITC    , PE-CY5.5 ,PE-CY7,Alexa Fluor 555 。Alexa Fluor 594,Alexa Fluor 647等標記類,更多詳詢。

【規        格】:50ul/100ul/200ul(更大包裝可詳詢)

【濃        度】:1mg/1ml

【抗體來源】:Mouse,Rabbit or Goat 

【交叉反應】:咨詢客服

【產品類型】:一抗 

【性        狀】:咨詢客服

【純化方法】:affinity purified by Protein A

【儲 存 液】:0.01M PBS, pH 7.4 with 10 mg/ml BSA and 0.1% Sodium azide

【產品應用】:not yet tested in other applications.optimal dilutions/concentrations should be determined by the end user.【保存條件】Store at -20 °C for one year. Avoid 【保存條件】repeated freeze/thaw cycles. The lyophilized antibody is stable at room temperature for at least one month and for greater than a year when kept at -20°C. When reconstituted in sterile pH 7.4 0.01M PBS or diluent of antibody the antibody is stable for at least two weeks at 2-4 °C.

磷酸化絲裂原活化蛋白激酶磷酸酶-1抗體Phospho-MKP1(Ser359)免疫標記,Western Blot抗體雜交:

孵育一抗

A. 先將需要檢測的抗體準備好,并決定好它們的稀釋度。

B. 配好5%的Milk(TBST溶解),按要求稀釋好抗體。注意,如需高比例稀釋,采用梯度稀釋。

C. 將稀釋好的抗體和膜一起孵育。 一般采用RT 1小時,可根據抗體量和膜上抗原量適當延長或縮短時間。

注意:為了便于后面分析結果,我們一般會選用已確定分子量大小

磷酸化絲裂原活化蛋白激酶磷酸酶-1抗體Phospho-MKP1(Ser359)免疫標記  免疫組化實驗操作步驟(以石蠟切片為例)

儀器、設備:

移液槍、免疫組化筆、水浴鍋、計時器、孵育濕盒、切片架、蓋玻片、光學顯微鏡、洗瓶等。

操作步驟

1.脫蠟水化。將石蠟切片置于新鮮二甲苯脫中浸泡 15 分鐘,重復三次。去除多余的液體后,依次置于無水乙醇、95%乙醇、90%乙醇、80%乙醇、70%乙醇,各浸泡 5 分鐘,蒸餾水(或自來水)沖洗 5 分鐘。用 PBS 緩沖液(試劑 1,將干粉溶解于 1L 去離子水中)沖洗切片 5 分鐘,重復三次。

2.抗原修復。將脫蠟水化后的組織切片置于燒杯(或修復盒)中的耐高溫塑料切片架上,加適量修復液 1× 檸檬酸鈉抗原修復液(試劑 2,將 100×檸檬酸鈉抗原修復液加去離子水稀釋成 1×檸檬酸鈉抗原修復液),液面要浸過切片組織一定高度,將修復盒置于沸水中煮沸修復 15 分鐘后取出玻片,自然涼至室溫。用 PBS 緩沖液沖洗切片 5 分鐘,重復三次。

注意:抗原修復時,修復液務必保證切片始終浸泡在液體內,一般情況:修復液的量約為 800mL/1 架。

3.阻斷內源性過氧化物酶。用吸水紙擦干玻片,免疫組化筆在組織周圍畫圈,滴加 50μL 內源性過氧化物酶阻斷劑(試劑 3)到切片組織上以阻斷內源性過氧化物酶,室溫孵育 30 分鐘,用 PBS 緩沖液沖洗切片 5 分鐘,重復三次。

4.血清封閉。用吸水紙擦干玻片,滴加 50μL 正常山羊血清工作液(試劑 5),37℃封閉 20 分鐘,以減少非特異性染色。

5.一抗孵育。用抗體稀釋液(試劑 4)將一抗原液稀釋成工作液,用吸水紙擦干玻片組織周圍的液體,滴加適量抗體工作液,置于濕盒 4℃孵育過夜或 37℃孵育 1h-2h。

6.復溫。4℃過夜后從冰箱拿出樣本,在室溫下孵育 15min 復溫(抗體孵育為 4℃過夜選用此步驟,如室溫孵育直接進入下一步清洗)。用 PBS 緩沖液沖洗切片 5 分鐘,重復三次。

7.二抗孵育。吸水紙擦干切片后滴加 50μL 生物素標記的羊抗兔 IgG(試劑 6),37℃孵育 20  分鐘,用 PBS緩沖液沖洗切片 5 分鐘,重復三次。

8.三抗孵育。吸水紙擦干切片后滴加 50μL 辣根酶標記的鏈酶卵白素孵育(試劑 7),37℃孵育 20  分鐘,用 PBS 緩沖液沖洗切片 5 分鐘,重復三次。

9.顯色。甩去 PBS 緩沖液,吸水紙擦干切片; 每張切片滴加新鮮配制的 DAB 工作液 50μL(試劑 8:試劑 9:試劑 1=1:1:18  比例配置),孵育 3-5min,光學顯微鏡下觀察染色結果,切勿顯色過深;顯色后用自來水沖洗切片終止顯色。

10.復染。滴加適量蘇木素染液(試劑 10)復染,孵育 1-5 分鐘,自來水沖洗 5 分鐘,滴加鹽酸酒精分化液分化 30 秒,自來水沖洗。

11.脫水封片。將玻片依次置于 70%乙醇、80%乙醇、90%乙醇、95%乙醇、無水乙醇,各浸泡 5 分鐘, 再將玻片放入二甲苯中浸泡 15 分鐘,重復三次。玻片取出來稍晾干,用中性樹膠封片。

我公司專業生產經營抗體抗原多肽，提供大量免疫組化試劑盒，還可提供免疫組化技術服務，服務項目及收費可以咨詢客服歡迎新老客戶咨詢訂購