大鼠、小鼠心臟干細(xì)胞（祖細(xì)胞）分離培養(yǎng)方法

心臟病是引起人類死因的一種代表性疾病，如果失去了心肌細(xì)胞，就會(huì)引起心力衰竭等心臟疾病。心肌細(xì)胞幾乎沒有再生能力，一旦失去就不能再生。從前認(rèn)為心臟當(dāng)中沒有干細(xì)胞，所以心肌沒有再生能力，但是近年的研究表明，成體心臟內(nèi)部也會(huì)存在一些心肌干細(xì)胞。公司開發(fā)出一種新型心肌干細(xì)胞培養(yǎng)方法，希望能為這項(xiàng)研究的科學(xué)工作者提供幫助。

       細(xì)胞培養(yǎng)操作：
       1.摘取出心臟，去掉心臟包膜，把心尖部分剪下來（心尖部分是心室部分，心肌細(xì)胞含量高）。
       2.剪碎，移入15或50ml離心管中，用PBS多洗幾遍，盡量把血細(xì)胞洗掉。
       3.加入2-3ml的50%血清+50%IMDM培養(yǎng)基，37℃、一小時(shí)浸泡。
       4.采用貼塊法：用槍把組織塊連同培養(yǎng)基一同移入T25瓶中，然后用槍吸出培養(yǎng)基。在培養(yǎng)箱中放置1-2小時(shí)，待組織粘貼在瓶底后，加入3ml含20%血清的IMDM培養(yǎng)基。
       5.在貼塊培養(yǎng)到第三、四天時(shí)，從組織塊上會(huì)脫落一些細(xì)胞團(tuán)和單個(gè)細(xì)胞，收集到15ml離心管中。
       6.采用300rpm離心（或自然沉淀），去上清，取沉淀部分的細(xì)胞培養(yǎng)（多為細(xì)胞團(tuán)）。
       7.用IMDM/DMEM/F12培養(yǎng)基培養(yǎng)：10%血清、30%IMDM、60%DMEM/F12、0.1mM β-ME、50xB27、20ng/ml bFGF、10ng/ml EGF。
       8.細(xì)胞團(tuán)中的細(xì)胞在第二天就會(huì)出現(xiàn)圓形擴(kuò)散生長(zhǎng)（呈集落生長(zhǎng)，像太陽發(fā)光的模樣），細(xì)胞形態(tài)不像成纖維細(xì)胞那樣呈梭形狀，而是有些偏圓。

       9.心臟干細(xì)胞生長(zhǎng)速度很快，兩三天就能長(zhǎng)滿。

  一站式細(xì)胞解決方案

    針對(duì)基礎(chǔ)及臨床研發(fā)中的原代細(xì)胞和iPS細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)，由于原代細(xì)胞的分離和培養(yǎng)難度大，iPS細(xì)胞制作和分化的實(shí)驗(yàn)操作復(fù)雜，除長(zhǎng)期進(jìn)行原代和iPS培養(yǎng)工作的實(shí)驗(yàn)室，想要獲得足夠量的狀態(tài)好的細(xì)胞比較困難。

    依靠多年在細(xì)胞培養(yǎng)方面的積累，為客戶提供完整的細(xì)胞CRO解決方案。根據(jù)客戶需求，直接在細(xì)胞水平進(jìn)行藥物或者試劑的刺激，觀察細(xì)胞狀態(tài)的變化或者特定通路上mRNA或蛋白的變化，也可以先制作動(dòng)物模型，對(duì)動(dòng)物進(jìn)行處理后，分離特定的原代細(xì)胞進(jìn)行需要的檢測(cè)。

    同時(shí)，我們可以依照客戶提供的具體實(shí)驗(yàn)方案進(jìn)行操作，也可以根據(jù)客戶要求進(jìn)行實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，并根據(jù)客戶實(shí)驗(yàn)的規(guī)模和難度提供詳細(xì)的報(bào)價(jià)和實(shí)驗(yàn)周期規(guī)劃。