pShuttle-CMV-N-Myc（腺病毒質粒）實驗操作説明

pShuttle-CMV-N-Myc含有CMV啟動子可以高效啟動目的蛋白在細胞中的表達；在多克隆位點的5'端含有一個可以編碼Myc標簽的序列，因此可以表達出含有Myc標簽的融合蛋白，可以方便地使用抗Myc的抗體來識別目的蛋白，有利于目的蛋白檢測和分離純化。

本質粒為卡那霉素抗性。

重組腺病毒(Recombinant adenoviruses)是一種常見的用于在培養細胞或動物體內表達外源基因的重要工具。重組腺病毒具有感染宿主細胞范圍廣、感染不依賴細胞分裂、高滴度及目的基因表達水平高等特性。常用的腺病毒載體是人類血清5型腺病毒。改造后的人類血清5型腺病毒，刪除了在病毒裝配過程中起關鍵作用的E1基因和非必須的能表達逃避宿主免疫的E3基因，E1和E3基因的刪除使得重組腺病毒不能自我復制，同時給外源基因的插入提供了空間，最長可插入7.5kb的外源基因。從而提高了重組腺病毒的的安全性和可操作性。再利用攜帶E1基因的AD-293、293A、HEK293等細胞作為包裝細胞就可以完成重組腺病毒的包裝。

pShuttle系列的穿梭質粒攜帶外源目的基因，經過Pme I線性化，隨后與腺病毒骨架質粒pAdEasy-1(8106)共轉染到大腸桿菌BJ5183中，或者轉染到已經已經預轉染了pAdEasy-1質粒的BJ5183菌株(8107)中同源重組。BJ5183菌株表達recET基因，具有很高的基因同源重組(homologous recombination)活性，使帶有目的基因的穿梭質粒與腺病毒骨架質粒pAdEasy-1通過末端反向重復序列同源重組，實現外源基因與腺病毒基因組的整合。將重組的攜帶外源基因的腺病毒質粒用Pac I線性化后轉染到AD-293、293A、HEK293等重組腺病毒包裝細胞中進行包裝。從而制備獲得高滴度、自我復制缺陷并且帶有目的基因的重組腺病毒。

目的基因引入時不能含有Pme I及Pac I這兩個酶切位點，如果含有該兩個酶切位點的目的基因，需要對該位點進行突變方可進行基因操作。

pShuttle-CMV-N-Myc質粒的主要信息如下：

pShuttle-CMV-N-Myc質粒的圖譜如下：

pShuttle-CMV-N-Myc的多克隆位點的的詳細圖譜見說明書

pShuttle-CMV-N-Myc中沒有的酶切位點(Restriction enzymes that do not cut pShuttle-CMV-N-Myc)包括：

pShuttle-CMV-N-Myc中的單酶切位點(Restriction enzymes that cut pShuttle-CMV-N-Myc)包括：

pShuttle-CMV-N-Myc質粒中推薦使用的測序引物序列如下：

forward primer (888-907): 5′GGTCTATATAAGCAGAGCTG3′

Reverse primer (1048-1070): 5′GTGGTATGGCTGATTATGATCAG3′

pShuttle-CMV-N-Myc的全序列信息:pShuttle-CMV-N-Myc.txt。

-20℃保存。

本質粒未經書面許可不得用于任何商業用途，也不得移交給訂貨人所在實驗室外的任何個人或單位。

本產品僅限于專業人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內。

為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。