質粒-干油菌到貨后如何保存

一、質粒干粉（負20度保存，保質期90天，常溫運輸）

1、收到干粉質粒后請先5000rpm離心1min,再加入20μl無菌水溶解質粒；

2、將相應的感受態于冰盒上解凍，取2μl質粒加至100μl感受態中，冰浴 30min；

3、42度熱激60s，冰浴2min，加入900μl無抗LB培養基，180rpm震蕩培養45min；

4、6000rpm離心3min，留100μl上清重懸，再涂至對應抗性的LB平板上；

5、倒置培養過夜后，如菌落過多則稀釋質粒轉化，如沒有菌落則取10ul質粒轉化；

6、挑單菌落至對應抗性的LB液體培養基中過夜震蕩培養，根據需要提取質粒。

一、液體質粒（負20度保存，保質期90天，冰袋運輸）

1、收到液體質粒后請甩動保存管，讓液體質粒不要吸附在管壁上；

2、根據實驗需求取適量質粒，其余保存于負20度冰箱。

二、甘油菌種（負80度保存，保質期90天，冰袋運輸）

1、收到甘油菌種后請甩動保存管，讓菌液不要吸附在管壁上；

2、用接種環在固體平板上四區劃線，如有抗性就加對應抗性；

3、恒溫培養箱倒置培養12~16h；

4、務必挑取單菌落接種于液體培養基中，如有抗性就加對應抗性；

5、搖床震蕩培養過夜，根據實驗需要培養菌種。

 三、平板菌種（4度保存，保質期7天，冰袋運輸）

直接挑取單菌落至液體培養基中，根據實驗需要培養菌種。