如何避坑——復(fù)蘇細(xì)胞不貼壁

細(xì)胞為什么要貼壁？

細(xì)胞貼壁的過(guò)程使形態(tài)發(fā)生很大變化，細(xì)胞形態(tài)改變是細(xì)胞內(nèi)骨架（是真核細(xì)胞中的蛋白纖維網(wǎng)架體系，由微管、微絲及中間纖維組成的體系）本身和細(xì)胞外基質(zhì)共同作用的結(jié)果。

密度大于培養(yǎng)基的細(xì)胞（絕大部分細(xì)胞）會(huì)沉降在底面上，那么細(xì)胞要生存必定得改善這個(gè)環(huán)境，分泌細(xì)胞外基質(zhì)，改善底面的結(jié)構(gòu)，然后很自然就貼附在底面上了。

密度小于水的細(xì)胞，如脂肪細(xì)胞，漂浮在液面上，所以不可能貼在底面上，但是如果將培養(yǎng)液加滿，那么細(xì)胞能夠與培養(yǎng)瓶上面的壁接觸同樣可以貼壁。因此可以說(shuō)，細(xì)胞貼壁是適應(yīng)環(huán)境的一種反應(yīng)。

細(xì)胞不貼壁，可能是這些原因？

細(xì)胞的傳代最重要的是胰酶處理時(shí)間：消化不夠細(xì)胞本身就是成團(tuán)的；若胰酶處理太久，容易造成細(xì)胞膜蛋白損傷，使細(xì)胞貼壁不緊，顯微鏡下觀察立體感不強(qiáng)，嚴(yán)重的時(shí)候甚至?xí)斐杉?xì)胞死亡。

缺少貼壁因子：血清中含有促貼壁因子，而無(wú)血清培養(yǎng)基工藝中由于缺少這種促貼壁因子，細(xì)胞的貼壁效果會(huì)下降很多。

支原體或細(xì)菌的污染。

培養(yǎng)液配置、儲(chǔ)存不當(dāng)，如 pH 值過(guò)堿，Gln 量太少等原因。

復(fù)蘇的細(xì)胞本身狀態(tài)不好，已經(jīng)老化，失去貼附性。

接種細(xì)胞數(shù)目太少，無(wú)法分泌足夠的細(xì)胞外基質(zhì)。

復(fù)蘇時(shí)處理速度太慢，復(fù)蘇過(guò)程不當(dāng)。

復(fù)蘇后注意事項(xiàng)

細(xì)胞復(fù)蘇后只有非常少量細(xì)胞貼壁，是不是需要重新復(fù)蘇？先不要著急丟掉！可以補(bǔ)加血清和細(xì)胞因子，或者每隔 2-3 天換新鮮的生長(zhǎng)培養(yǎng)基，經(jīng)過(guò) 2-3 次換液后，大部分細(xì)胞就能看到明顯增殖，此時(shí)再按照正常傳代操作即可。

細(xì)胞復(fù)蘇后剛開始已經(jīng)貼壁了狀態(tài)不錯(cuò)，后面第二天開始出現(xiàn)死亡現(xiàn)象，這個(gè)情況可能是凍存前細(xì)胞消化過(guò)度，或者凍存中收凍存液shahai細(xì)胞凋亡導(dǎo)致的情況。