Exonuclease T （核酸外切酶T）試劑

Exonuclease T （核酸外切酶T）試劑又稱(chēng)為 RNase T，是一種單鏈 RNA 或 DNA 特異性核酸酶，該核酸外切酶T需要游離的 3′ 末端，

以 3′-5′ 方向去除核苷酸。核酸外切酶T可用于將含有 3′ 突出末端的 RNA 或 DNA 生成平末端。

本產(chǎn)品是通過(guò)重組表達(dá)Exonuclease T 基因而得的高純度蛋白，無(wú)核酸內(nèi)切酶和其他外切酶的污染。

組分

名稱(chēng)數(shù)量

Exonuclease T (5 U/μl)50 μl/500 μl

10X Exonuclease T Buffer1 ml/1 mlx5

單位定義

在 100 μl 反應(yīng)體系中，25℃ 條件下，30 分鐘內(nèi)能從1 nmol [3H]-標(biāo)記的聚胸腺嘧啶核苷催化產(chǎn)生 0.1 nmol 的可溶于TCA的 

DNA 所需要的酶量定義為一個(gè)活性單位。

1X Exonuclease T Buffer

50mM KAc，20mM Tris-Ac，10mM Mg(Ac)2，1mM DTT（pH 7.9）

酶保存液

10 mM Tris-HCl, 50 mM KCl, 1 mM DTT, 0.1 mM EDTA, 50% Glycerol, 200 μg/ml BSA, pH 7.5。

儲(chǔ)存

置于-20°C，可保存3年。

使用注意事項(xiàng)

核酸外切酶T對(duì)RNA 和DNA 具有不同的活性。對(duì)于 RNA，在標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)條件下，通過(guò)凝膠電泳檢測(cè)，1單位核酸外切酶T可以消化 1.0 pmol的rA20。

Exonuclease T （核酸外切酶T）試劑恒溫?cái)U(kuò)增使用策略及實(shí)例展示

應(yīng)用實(shí)例1：在以A3824-03或 A3828-03，用 LP1002引物組進(jìn)行的LAMP測(cè)試。Bst4.0 SYBR Green試劑可在標(biāo)準(zhǔn)定量PCR儀或恒溫?zé)晒鈨x上進(jìn)行反應(yīng)。以體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板，1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應(yīng)25min的檢測(cè)結(jié)果，可以看到檢測(cè)反應(yīng)<20min(達(dá)平臺(tái)期)。

應(yīng)用實(shí)例2： 用 LP1002引物組進(jìn)行的LAMP測(cè)試。OG變色法為終點(diǎn)變色策略，在反應(yīng)結(jié)束后，倒置反應(yīng)管，溶解管蓋上染料后，陽(yáng)性樣本呈現(xiàn)出醒目的綠色，陰性表現(xiàn)出橙色，區(qū)分明顯。且該方法不受樣本類(lèi)型限制，雜質(zhì)耐受性很好。以體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板，1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應(yīng)20min后檢測(cè)結(jié)果。

應(yīng)用實(shí)例3：A3825-01 紅黃變色反應(yīng)（肉眼觀察）

以 體外轉(zhuǎn)錄 RNA 為模板，1-6分別為1、10 、100、1000、104和106Copy，NTC為ddH2O為模板。 上圖為加樣結(jié)束反應(yīng)起

始前，下圖為 65 度反應(yīng) 30min 后。

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